东曹（上海）生物科技有限公司

近日，农业农村部发布了5项奶业相关标准，其中包括NY/T 4630—2025《牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定 高效液相色谱法》，该标准于2025年5月1日正式实施。

随着人们生活水平的提高，奶制品在中国的消费量增加迅速。但婴幼儿中牛乳蛋白过敏症（cow′s milk allergy, CMA）的发生较为普遍，并且呈逐年上升趋势，婴幼儿主要是对β-乳球蛋白和α-乳白蛋白过敏，因此，建立牛乳β-乳球蛋白和α-乳白蛋白高特异性、高灵敏度、快速、准确的检测方法，将对维护CMA患儿的健康起到积极的作用。

本应用参照上述标准，使用高性能尺寸排阻色谱柱TSKgel UP-SW3000（4.6 mmI.D.×30 cm, 2 μm）建立了牛乳及其制品中β-乳球蛋白和α-乳白蛋白检测方法。

一、溶液配置

1.1 盐酸溶液：取450 mL的浓盐酸 (含量 36.0%-38.0%) ，用水稀释定容至500 mL，混匀。

1.2 氢氧化钠溶液 (500 g/L) ：称取250 g氢氧化钠，加入适量水溶解，冷却至室温，定容至500 mL，混匀。

1.3 磷酸盐缓冲溶液：称取56.6 g磷酸氢二钠、3.5 g磷酸二氢钠和 2.9 g乙二胺四乙酸，加入800 mL水溶解，混匀。用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节 pH 至 7.5 ± 0.1。将溶液转移至 1 L容量瓶，用水定容，混匀。临用现配。

1.4 盐酸胍缓冲溶液：称取 573 g盐酸胍，置于1000 mL烧杯中，添加100 mL 磷酸盐缓冲溶液，加水将该溶液稀释至约 900 mL，同时不停搅拌，用氢氧化钠溶液调节pH至7.5±0.1。将溶液转移至1 L容量瓶，用水定容，混匀。过微孔滤膜。临用现配。

1.5 混合标准储备溶液 (10 mg/mL) ：准确称取适量α-乳白蛋白标准品 (CAS 号：9051-29-0，纯度≥ 95%) 和β-乳球蛋白标准品 (CAS号：9045-23-2，纯度≥95%) 于10 mL容量瓶中，用水稀释并定容，混匀。-20℃以下保存，有效期3个月。混合标准系列溶液：准确移取混合标准储备溶液，用盐酸胍缓冲溶液稀释并定容至10 mL，配制成浓度分别为 5 mg/L、20 mg/L、80 mg/L、150 mg/L、300 mg/L和600 mg/L 的标准系列溶液。临用现配。

二、样品预处理

高温杀菌牛乳、灭菌牛乳平行做两份试验。称取试样12.5 g（精确至 0.1 mg）于烧杯中，加入10 mL水，混匀，用盐酸溶液（1.1）调节pH至4.60 ± 0.05，转移至 25 mL容量瓶中，加水定容，混匀。转移至离心管中，静置 2 h，12000 r/min 离心10 min。准确移取上清液1 mL于5 mL容量瓶中，加入盐酸胍缓冲溶液（1.4）3 mL，再加入50 µL β-巯基乙醇，用盐酸胍缓冲溶液（1.4）定容，混匀，室温静置2 h，摇匀后过膜为试样溶液，待测。

三、实验条件

色谱柱：        TSKgel UP-SW3000（4.6 mmI.D.×30 cm, 2 μm）

流动相：        盐酸胍缓冲溶液1.4

流速：            0.18 mL/min

检测：            UV@280 nm

进样量：        10 µL

四、分析结果与讨论

图1 β-乳球蛋白及α-乳白蛋白混合标准溶液色谱图

五、研究结论

使用TSKgel UP-SW3000色谱柱建立了牛乳及其制品中β-乳球蛋白和α-乳白蛋白检测方法 (图1) ，β-乳球蛋白及α-乳白蛋白峰分离度大于1.5。以β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线 (图2,3) ，其相关系数均大于0.99。该方法具有省时、检测灵敏度高等优点。

食品中的膳食纤维是人体的第七大营养素，具有抑制糖脂吸收，促进肠道蠕动等生理保健功能。食品中膳食纤维的含量检测对于衡量食品包装的营养成分标识准确性具有重要作用。今年9月，国家卫生健康委员会、国家市场监管总局发布了GB 5009.88-2023《食品安全国家标准 食品中膳食纤维的测定》等85项食品安全国家标准和3项修改单。该标准将于2024年3月6日正式实施。本标准将替代GB 5009.88-2014《食品安全国家标准食品中膳食纤维的测定》。

本应用参照上述新国标，使用凝胶色谱柱TSKgel G2500PWXL（7.8 mmI.D.×30 cm, 7 μm）两支串联对D-葡萄糖做标准系列工作液定量分析。按照国标中的要求，标准曲线过0点的斜率为1.2545即为响应因子（Rf），蔗果三糖与麦芽糖的分离度也达到了1.82，符合国标中基线分离的要求。

一、溶液配制

1）二甘醇内标溶液 (100 mg/mL) ：准确称取10 g二甘醇，用水稀释，转移至100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，现用现配。

2）D-葡萄糖标准溶液 (10 mg/mL) ：准确称取1 g D-葡萄糖，用水溶解后转移至100 mL容量瓶中，加水定容至刻度。现用现配。

3）D-葡萄糖/二甘醇溶液标准系列工作液：分别吸取0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL和8.0 mL 10 mg/mL D-葡萄糖标准溶液至10 mL容量瓶中，再加入0.2 mL 100 mg/mL二甘醇内标溶液，加水稀释并定容至刻度。标准系列工作液中D-葡萄糖含量分别相当于0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、4.0 mg/mL和8.0 mg/mL，二甘醇含量相当于2.0 mg/mL。现用现配。

4）定性用标准溶液：称取0.1 g蔗果三糖和0.1 g 麦芽糖一水合物，用水溶解，转移至50 mL容量瓶中，加入1 mL 100 mg/mL二甘醇内标溶液，加水定容至刻度。现用现配。

二、分析条件

仪器：Thermo Ultimate 3000  

色谱柱：TSKgel G2500PWXL × 2根串联（7.8 mm I.D.×30 cm, 7 μm）

流动相：水

流速：0.5 mL/min

柱温：80℃

进样量：20 μL

检测器：RI@50℃

三、分析结果

图1  定性用标准溶液

图2  D-葡萄糖标准系列工作液

图3  木糖浓度-峰面积校正曲线

近日，东曹集团宣布将对位于山口县南阳事业所的填料生产工厂 (产品：TOYOPEARL^®和TSKgel^®PW) 进行产能提升，以应对日益增长的抗体、核酸药物的纯化需求。

层析填料是东曹生命科学事业部的主力产品之一，应用于生物制药生产的下游纯化工艺及其他工艺中。目前，东曹的填料已经在抗体及其衍生物的纯化中被广泛使用。除了这一仍在保持增长的市场以外，生物制药领域正在扩展到基因治疗、RNA疫苗和药物以及其他形式。特别是寡核苷酸药物的研发、生产正逐渐成为生物医药投资的重点。为了满足该市场快速增长的需求，东曹将大幅增加生产能力，确保填料产品的稳定供货。

此外，东曹还将继续对分离纯化预装柱 (SkillPak^TM) 和连续流色谱系统 (Octave^®) 加大投资，致力于为用户提供生物制药生产工艺整体解决方案。

该产能扩张计划有助于公司应对不断增长的市场需求，同时伴随着相关产品线的扩充，东曹今后将进一步扩大其在生物制药领域的业务。

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