江苏愚公生物科技有限公司

在生物制药领域，动物源原料存在安全风险。《美国药典》和《欧洲药典》很早就建议医用产品的生产应优先考虑使用“非TSE相关动物物种材料”或“无动物源材料”，降低安全风险。中国国家药品监督管理局药品审评中心2020年8月发布的《新型冠状病毒预防用mRNA疫苗药学研究技术指导原则（试行）》中也明确指出：“原液和制剂生产过程中原则上应避免人或动物来源的成分。”

限制性内切酶是mRNA疫苗研发与生产过程中制备体外转录模板的重要原料酶，同样需要遵循上述要求。愚公生物作为国内唯一能够规模化生产多种限制性内切酶的企业，已推出多款无动物源成分 (ADCF) 限制性内切酶，希望为mRNA疫苗领域贡献出一份力量。

何谓ADCF？

ADCF (Animal Derived Component Free) 指不含动物来源相关成分。对于工具酶生产而言，在发酵重组表达、纯化、缓冲液配液等的各个环节，都不使用包含动物来源的成分，符合疫苗和抗体生产原料的相关要求。

愚公生物ADCF系列限制酶的特点

▎生产全程不使用含动物源性成分

包括不使用动物源成分培养基、不使用抗生素、不使用肝素纯化、缓冲液中不使用牛血清白蛋白 (BSA) 等。

▎更严格的质量标准

针对疫苗和核酸药物生产要求，参考《中国药典2020版》等法规，对ADCF系列限制酶制定了更严格的质量标准和质检项目。

mRNA疫苗生产过程中，以DNA为模板通过体外转录反应 (IVT) 获得mRNA后，需要及时去除残留的DNA模板，以避免后续造成不良影响。经典策略是使用DNase I降解DNA，但常规DNase I还存在两个问题：

（1）耐盐性差

DNase I在含有Ca²⁺与Mg²⁺且不含其他盐离子的缓冲液中才具有最高活性，而溶液中Na⁺浓度提高到30 mM以上就会抑制DNase I活性。体外转录所使用的T7 RNA聚合酶缓冲液、NTPs等原料往往含有一定浓度的Na⁺，虽然一般DNase I的用量都是远远超过降解DNA模板所需用量，但盐离子仍然可能会使DNase I反应效率不稳定，导致降解不彻底。

（2）DNA亲和力偏弱

常规DNase I与DNA的亲和力偏弱，对低浓度DNA切割效率不足。随着反应进行，DNA浓度逐渐降低，最后剩余的DNA无法彻底清除。

针对上述问题，愚公生物通过蛋白质理性设计改造（发明专利申请中），在野生型DNase I基础上获得了新型耐盐DNase I-ST产品。DNase I-ST大幅增强了与DNA的亲和力，不仅提高了盐离子耐受性，还提升了降解低浓度DNA的效果，对于从体外转录产物中彻底去除DNA而言尤为重要。

耐盐性好

如图所示，与野生型相比，2U DNase I-ST在300 mM的NaCl浓度下仍能基本完全消化1 μg质粒DNA，琼脂糖凝胶电泳基本无可见条带。

DNA降解效率高

分别使用不同厂商的IVT反应体系（盐浓度不同），在20 μl反应体系中同样以1 μg线性化质粒DNA为模板完成体外转录，然后分别加入2 U DNase I（3种耐盐型、1种野生型）在37℃处理15 min。处理后的RNA产物经过柱纯化回收后，使用探针法qPCR检测DNA残留水平。每个样本的平均Ct与标准曲线进行比较，确定残留DNA的量以及去除百分比。

愚公DNase I-ST特点

01 DNA亲和力大幅提升，催化效率更高

02 耐盐性好，在含有300 mM盐的溶液中仍能高效降解DNA

03 重组表达，无RNase污染

04 尤其适合清除体外转录反应后的DNA模板

相关产品

6月30日，连云港市委书记马士光主持召开全市重点产业项目暨招商引资推进会，会前进行了重点产业项目现场观摩活动。马士光一行走进愚公生物，察看GMP-like车间建设和试生产情况，与总经理许恒皓博士深入交流，仔细了解项目进度、生产工艺、产品应用、安全环保等情况，鼓励企业立足自身优势，坚定投资信心，加强技术攻关，积极开拓市场。看到公司建设项目稳步推进，马士光给予肯定。他强调，要积极加快产业集聚步伐，促进上下游企业协同互补，不断提升产业链供应链韧性和安全水平。要鼓励引导企业加大科技创新、节能减排、安全生产投入力度，更好实现高质量发展。

                                                                 （愚公生物总经理许恒皓博士向马士光一行介绍公司情况）

    参加考察活动的还有市政协主席王加培，市委副书记、组织部部长卢刚等市四套班子领导，以及相关县区（板块）、职能部门和主要国企负责人约80余人。

      江苏愚公生物科技有限公司致力于解决国内生物医药高端原料酶和工具酶“卡脖子”现状，为中国生物医学行业提供更多优质、经济、使用方便，且拥有自主知识产权的酶产品。公司总部位于中国（江苏）自贸区连云港片区，参照GMP标准建设与管理；子公司江苏百时美生物科技有限公司位于连云港国家级高新区，主要承担原酶研究和科研试剂生产。

                                                                                                    （厂区分工和对比）

                                                                                      （愚公生物GMP-like生产车间）

 秉承愚公移山的精神，愚公生物在国内首次实现了限制性内切酶的规模化生产，打破国外企业40余年的完全垄断。现拥有限制酶、PCR、等温扩增、逆转录、荧光定量PCR、修饰克隆、体外转录、速溶颗粒等10个系列上百种产品，进入多家行业龙头企业的供应链。

愚公生物GMP生产基地正式投产

首批GMP级限制酶上市

▶愚公GMP生产基地

为了满足mRNA疫苗药物、细胞治疗和分子诊断等领域用户对原料质量的高标准要求，愚公生物GMP级别生产基地一期工程已于2023年8月正式竣工投产。基地位于中国（江苏）自贸区连云港片区，一期工程建设面积4000平方米，包括1200平方米的洁净车间。建有2条独立生产线，年产能满足20亿人份mRNA疫苗生产原料需求。

质量标椎

基地依照QBD（质量源于设计）理念，在厂房布局、公用工程、仪器设备选型、人员任职资质等方面均遵循GMP规范及其它相关法规要求。洁净车间拥有两条独立生产线，均设有100 L微生物发酵、分离、层析纯化系统，所有物料采用密闭管道进行传输，最大限度避免暴露与交叉污染风险。配套的纯化水、压缩空气、空调等公用工程，也全部按照GMP规范安装、调试、性能确认后投入使用。

▶愚公GMP生产车间

对于GMP级别原料蛋白产品，愚公生物保证整个生产过程以及原辅料全程可追溯，不使用抗生素和任何动物来源的原料及辅料，对宿主蛋白、外源DNA、非特异性内切酶、DNase、RNase等工艺相关杂质，以及微生物限度、细菌内毒素等进行严格控制，从而满足疫苗与药物生产、细胞治疗等领域对原辅料的要求。

愚公生物首批GMP Grade产品

GMP Grade限制性内切酶，用于mRNA疫苗生产中将带有抗原编码基因的环状质粒DNA线性化，生成线性的体外转录模板。

更多GMP Grade产品将陆续推出。